人結(jié)合珠蛋白(HAP)酶聯(lián)免疫分析

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
10μg/ml -400μg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)合珠蛋白(HAP)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人結(jié)合珠蛋白(HAP)水平。用純化的人結(jié)合珠蛋白(HAP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入結(jié)合珠蛋白(HAP)，再與HRP標記的結(jié)合珠蛋白(HAP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的結(jié)合珠蛋白(HAP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人結(jié)合珠蛋白(HAP)濃度。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7

人結(jié)合珠蛋白(HAP)酶聯(lián)免疫分析

終止液
6ml×1瓶

2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(480μg/ml)
0.5ml×1瓶

3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶

人結(jié)合珠蛋白(HAP)酶聯(lián)免疫分析

4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份

5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張

6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個
 

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240μg/ml
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

120μg/ml
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

60μg/ml
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

30μg/ml
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

15μg/ml
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
 

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月